L-亚氨基乙基鸟氨酸与过量氟共培养对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞一氧化氮/内皮型一氧化氮合酶表达的影响

作者: 朱丹 [1] 刘宇平 [1] 桂传枝 [1] 官志忠 [2]

关键词: 氟 人神经母细胞瘤细胞 内皮型一氧化氮合酶 一氧化氮

摘要:目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)特异性抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸(L-iminoethyl ornithine hydrochloride,L-NIO)对氟致体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡、eNOS mRNA和蛋白表达以及一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性改变的影响.方法 将体外培养的SH-SY5Y细胞分为对照组、低氟组、高氟组、L-NIO组、低氟+L-NIO组、高氟+ L-NIO组,n=3.对照组加入与实验组等体积的培养液,低氟组和高氟组加入氟化钠(sodium fluoride,NaF)浓度分别为0.2、2.0 mmol/L,L-NIO组加入3μmol/L L-NIO,低氟+L-NIO组和高氟+L-NIO组分别加入0.2 mmol/L NaF和3μmol/L L-NIO、2.0 mmol/L NaF和3μmol/L L-NIO,培养时间为48 h.采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中eNOS蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR)法检测细胞中eNOS mRNA表达水平,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,硝酸还原酶法和比色法检测细胞培养液中NO含量和NOS活性.结果 与对照组(1.000±0.026)比较,低、高氟组eNOS蛋白表达量(1.108±0.071、1.349±0.057)升高,L-NIO组(0.755±0.148)下降(P均<0.05);与低氟组比较,高氟组升高,低氟+ L-NIO组(0.802±0.115)下降(P均<0.05);与高氟组比较,高氟+L-NIO组(0.988±0.135)下降(P<0.05).与对照组(1.000±0.018)比较,低、高氟组eNOS mRNA表达量(1.809±0.099、2.416±0.295)升高,L-NIO组(0.609±0.077)下降(P均<0.05);与低氟组比较,高氟组升高,低氟+L-NIO组(1.040±0.034)下降(P均< 0.05);与高氟组比较,高氟+L-NIO组(1.233±0.152)下降(P<0.05).与对照组[(1.66±0.07)%]比较,低、高氟组细胞凋亡率[(8.81±0.27)%、(17.60±0.20)%]升高,L-NIO组[(1.03±0.04)%]下降(P均<0.05);与低氟组比较,高氟组升高,低氟+ L-NIO组[(6.03±0.10)%]下降(P均<0.05);与高氟组比较,高氟+L-NIO组[(12.12±0.08)%]下降(P<0.05).与对照组[(2.773±0.145) μmol/L]比较,低、高氟组细胞培养液中NO含量[(8.251±1.047)、(14.287±1.062) μmol/L]升高,L-NIO组[(1.648±0.155) μmol/L]下降(P均<0.05);与低氟组比较,高氟组升高,低氟+L-NIO组[(4.622±0.252)μmol/L]下降(P均<0.05);与高氟组比较,高氟+L-NIO组[(7.899±0.385) μmol/L]下降(P<0.05).与对照组[(0.507±0.041)U/ml]比较,低、高氟组细胞培养液中NOS活性[(0.772±0.032)、(2.258±0.062)U/ml]升高,L-NIO组[(0.346±0.015)U/ml]下降(P均<0.05);与低氟组比较,高氟组升高,低氟+L-NIO组[(0.637±0.026)U/ml]下降(P均<0.05);与高氟组比较,高氟+ L-NIO组[(1.161±0.071)U/ml]下降(P<0.05).结论 过量氟可导致SH-SY5Y细胞eNOS蛋白和mRNA过度表达以及细胞凋亡率上升,细胞培养液中NO含量增多以及NOS活性增强,加入L-NIO与氟共培养后可拮抗氟对SH-SY5Y细胞的损伤,起到一定的神经保护作用.


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